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PFU DNA聚合酶(编号:BLE025-2A)

PFU DNA聚合酶



产品分类

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  • PFU DNA聚合酶(编号:BLE025-2A)

  • 英文名称
    Pfu DNA Polymerase
  • Cas 号
    9012-90-2
  • EC 编号
    /
  • 来源
    嗜热古细菌 (Pyrococcus furiosus)
  • 包装
    500U/200ul
    5KU/1ml
    20KU/4ml
    100KU/20ml
  • 库存
    4000
  • 购买数量
  • 价格
    0.00元

产品货号

产品名称

包装规格

BLE025-2A-500U

PFU DNA聚合酶

500U/200ul

BLE025-2A-5KU

 5KU/1ml

BLE025-2A-20KU

20KU/4ml

BLE025-2A-100KU

100KU/20ml

Pfu DNA 聚合酶(Pfu DNA Polymerase)是一种高保真耐高温DNA聚合酶,来源于克隆有Pyrococcus furiosus  DNA聚合酶基因的大肠杆菌,该酶同时具有5'-3'聚合酶活性和3'-5'外切核酸酶活性,没有反转录酶活性。因此在聚合反应中可纠正错误掺入的碱基,忠实性极高。Pfu的保真性是TaqDNA聚合酶的10-15倍。体外实验中,在聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)中,使用Pfu聚合酶可以快速,高保真的扩增DNA片段。主要用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCRDNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

产品名称

PFU DNA聚合酶(Pfu DNA Polymerase

酶学编号

/

CAS编号

9012-90-2

    

嗜热古细菌(Pyrococcus furiosus

    

溶液(含50%甘油)

  

5U/μl

  

≥95%SDS-PAGE

单位定义

1个活性单位(U)是指以合成的发夹型寡核苷酸序列作为模板/引物,在 74℃6min内,将0.14nmol脱氧核糖核酸聚合成双链DNA中所需的酶量

  

常规PCR

基因的高保真PCR,克隆和表达;

反转录PCR (RT-PCR)

双平端PCR克隆;

定点突变。

贮藏条件

温度:-25℃~ -10℃保存 (注:避免温度低于-25℃发生冻结;若长时间冻结会导致活性部分丧失)

有效期:12个月

推荐使用条件

储存缓冲20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.2), 1 mmol/L DTT, 0.1 mmol/L EDTA, 100 mmol/L KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20, 50% (v/v) 甘油。

10×Pfu Buffer (with Mg2+)200 mmol/L Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mmol/L (NH4)2SO4, 20 mmol/L MgSO4, 100 mmol/L KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA

注意事项:

1失活/抑制:酚氯仿抽提可以使Pfu DNA聚合酶失活

2由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Pfu DNA聚合酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

3Pfu DNA polymerase在扩增DNA片段时的出错率非常低,但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况,例如RT-PCR进行定量或半定量,推荐使用Taq DNA 聚合酶。在扩增2kb以下DNA片段时,Pfu DNA 聚合酶和Taq DNA 聚合酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下,须选择Pfu DNA 聚合酶。

4Pfu DNA 聚合酶有3'5'的外切酶活性,在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu DNA 聚合酶一定要最后加入,并且要在冰浴上操作。

5不能使用Taq DNA 聚合酶的PCR Buffer来替代Pfu DNA 聚合酶的PCR Buffer

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